安捷伦液相色谱使用问题与解决方案 Agilent LC 问题与答案(下)

发布日期：2017-05-05 作者：Admin 来源：陕西科仪 点击：191

13.什么原因导致柱效（理论塔板数）下降？

与色谱柱相关的原因：

(1)色谱柱中间出现间断;处理方法:使用类似的填料填充空隙或更换色谱柱

(2)保护柱无法再用;处理方法:更换保护柱

(3)其他可能的原因：柱外体积大、进样的样品量大、样品溶剂强度比流动相大、流动相的改变。

14.改变填料孔径大小对液相色谱分离有什么影响？

填料孔径越小，允许的流动相线速度越高。最佳流动相线速度取决于固定相的颗粒大小。在最佳线速度时，色谱柱生成的理论塔板数最多。对于内径为 4.6mm 的色谱柱，10um 的颗粒流动相线速度为 0.75ml/min 或 5um 的颗粒流动相线速度为 1.5ml/min 时，塔板数最多。

15.改变色谱柱直径对液相色谱分析有什么影响？

如果色谱柱直径减半，则灵敏性增加四到五倍（假设进样量不变）。例如，等量的样品进样到内径为 2.1mm 的色谱柱比进样到内径为 4.6mm 的色谱柱所生成的峰高 5 倍左右。 只要线性流动保持不变，则柱效率、理论塔板数、反压和分析时间等参数均与色谱柱内径的减小无关。

16.改变填料颗粒大小和色谱柱的长度对液相色谱分离有什么影响？

如果填料颗粒大小减半，则理论塔板数加倍（假设柱长不变）。如果填料颗粒大小减半，则柱压增加为原来的四倍。 如果柱长加倍，则理论塔板数加倍。如果柱长加倍，则分析时间加倍。随着柱长增加，柱压也线性地增加。 以下是一个根据上述信息选择色谱柱的示例： 一个装填 10um 填料的长度为 200mm 的色谱柱可生成 6000 块理论塔板，这是在很多情况下能提供比较适当的分离的色谱柱效率。将颗粒大小由 10um 减小到 5um，柱长仍为 200mm，则可生成 12000 块理论塔板。然而，这个色谱柱可生成相当于原来四倍的柱压。通常情况下不需要生成 12000 块塔板，因此柱长可减半至 100mm，结果生成 6000 块塔板，同时分析时间也缩短一半；柱压仅比最初装填 10um 填料的长度为 200mm 的色谱柱高两倍。

17.能否提供一种与我使用的LC色谱柱相同的色谱柱？

即使用同一种固定相，不同厂商的液相色谱柱也可能具有不同的保留时间。 虽然这里提供了一些不同厂商的色谱柱的参考数据，但这些数据在不同的色谱条件下会有所不同。我们通常根据您的应用情况，向您推荐一种其它的色谱柱。在此之前，我们需要您提供以下信息： 样品的详细信息（样品的成分和要分析的成分）； 是否可以接受液相色谱条件的改变； 能否对您的方法进行一些调整。 如果您不能接受分析条件和/或保留时间的改变，则应该继续使用目前的色谱柱。

18.如何选择液相色谱保护柱？

保护柱的作用是用来防止分析柱被一些微粒物质堵塞,及在色谱柱上强吸附组分在色谱柱上吸附。为防止样品的杂质不进入色谱分析柱,不出现不必要的峰展宽，保护柱与分析柱的体积比应在 1:15 至 1:25 之间。 在理想的情况下，保护柱的填料应与分析柱相同，以确保得到分析柱较好的色谱图。尽量使保护柱与分析柱近似。在我们的目录里，将分析柱和与其配套的保护柱列在一起。

19.色谱图上出现鬼峰。如何消除？

可能的原因有：

(1)上次进样遗留组分产生

(2)有污染

(3)有气泡

(4)色谱柱问题

(5)保护柱失效

建议用户:

(1)做样品后应保证有足够时间冲洗色谱柱,。有必要的话在运行结束后使用更强溶剂冲洗色谱柱。

(2)洗脱原色谱柱中的原有污染。

(3)为确保系统中没有气泡，只使用彻底脱气后的溶剂。

(4)更换色谱柱。

(5)更换保护柱。

(6)检查流动相纯度。

(7)检查样品中的其他成分。

20.我的色谱图上的峰有拖尾现象。如何改善峰形？

可能的原因：

(1)系统内的死体积大

(2)样品在色谱柱上有吸附

(3)色谱柱使用时间很长

建议用户：

(1)尽量减少流动相管线的死体积，确保管线接头的连接合适减小死体积，由于不同生产厂家的管线的接头和密封垫圈有可能不一样，尽量使用安捷伦公司的管线接头和密封垫圈。

(2)使用洗脱更强的流动相

(3)更换新色谱柱

21.什么原因导致基线波动？

基线波动有可能与实验室的温度及湿度变化有关系。需确保室温及湿度稳定，将仪器从通风橱中取出，并将色谱柱和毛细管进行隔热保温。

22.什么原因导致基线毛刺？

这很有可能是流动池内有气泡。请先停泵来进行确认,如果毛剌消失，则很有可能是由于流动池内有气泡。需要冲洗流动池。如果毛剌仍然存在，则需检查检测器本身的电噪音有关。如果需要更多帮助，则请致电安捷伦科技公司。在中国，请拨打800 820 3278。

23.如何减少基线噪音？

无规律噪音可能与污染有关。请冲洗色谱柱，对样品做合适的前处理以避免污染，并使用 HPLC 级别的溶剂。 连续噪音有可能由检测器或泵造成。要确定问题是否发生在检测器还是在泵，请先关泵停掉流量，监测基线。如果此时基线平稳，则噪音可能与泵有关系。使用 ChemStation 在线诊断或 LC 手持控制器检查泵方面的故障。如果停泵后噪音继续存在，则说明噪音与检测器有关。首先，请尝试更换灯。如果问题依然存在，则请与安捷伦科技公司联系。

24.如何避免液相基线飘移？

基线向上飘移表明系统中有污染。请冲洗色谱柱，净化样品，然后使用新溶剂。 向下飘移通常是由于检测室或柱箱中的温度波动的原因。减小室温变化，将仪器从通风橱中取出，并将色谱柱和毛细管保温隔热。向下飘移也可能由于溶剂的纯度不是 HPLC 级别的溶剂而且此纯度低的溶剂在紫外有吸收。

25.如何排除流动相/流动池中的气泡？

避免流动相中产生气泡的最佳方式是将流动相经脱气装置进行脱气。如果没有脱气装置，则可以在流动相溶剂瓶中通入氦气进行脱气。也可以在检测器的出口端加一根细管线以调节流动池中的背压，但必须注意不要超过流动池的最大压力，否则会造成流动池漏液或流动池损坏。 如果流动池中出现气泡，则先摘下色谱柱，用一根管线直接将流动相接入检测器的入口。将异丙醇以较大的流速注入流动池。 直到基线上看不到尖峰为止。气泡就应该清除掉了。